Biologischeactiviteit in complex coacervaten

Biologische activiteit in complex coacervaten

Saskia Lindhoud, Nanobiophysics, Universiteit van Twente

Complex coacervaten zijn dikke vloeistoffen die gevormd kunnen worden wanneer je oplossingen met positief en negatief geladen polymeren (die worden ook wel polyelectrolyten genoemd) bij de juiste pH en zoutconcentratie met elkaar mengt. Je krijgt eerst kleine druppeltjes dikke vloeistof en deze kan je verzamelen wanneer je centrifugeert.

Als je er ook enzymen bij mengt kan je die in deze dikke vloeistof “vangen”.

Met behulp van UV kan je heel makkelijk de concentratie van de eiwitten of enzymen bepalen in het supernatant.

Hier is een schema:

De rode moleculen en blauwe moleculen zijn de tegengesteld geladen polymeren en de oranje bolletjes zijn de eiwit moleculen of enzymen.

De onderzoeksvraag van dit project is: zijn eiwitten biologisch actief in complex coacervaten?

Het eiwit waar we de biologische activiteit van gaan onderzoeken is flavodoxine. Dit eiwit is afkomstig uit bacteriën. Flavodoxine bindt de cofactor flavin mononucleotide (FMN). Deze cofactor is relatief makkelijk uit het eiwit te halen. De cofactor is fluorescent.

Dit project bestaat uit de volgende stappen:

1.

Flavodoxine tot expressie brengen en opzuiveren.

2.

Cofactor en eiwit van elkaar scheiden

3.

Complex coacervaten maken met en zonder flavodoxine

4.

Cofactor binding bestuderen van flavodoxine en FMN in buffer en in complex coacervaten d.m.v. een fluorescentie quenching assay

Geïnteresseerd? Voor meer informatie mail naar:

s.lindhoud@utwente.nl